SFC/EM Investigación

El CROI es una conferencia internacional sobre retrovirus que se ha celebrado en Boston y ha terminado hoy
http://www.retroconference.org/2011/

Este es el artículo-síntesis del dr.Soriano del H.Carlos III
http://medicablogs.diariomedico.com/vso ... irus-xmrv/

Y estas son las comunicaciones sobre XMRV, de las cuales ¡5! son españolas
http://www.retroconference.org/Abstract ... fault.aspx" onclick="window.open(this.href);return false;

Algunas de las conclusiones:
Hospital 12 de Octubre:
Nuestros resultados sugieren que la contaminación cruzada de muestras o reactivos según lo informado por otros grupos [13,
14, 15, 16, 17]. PCR específica para la detección de XMRV / MLV secuencias relacionadas con cebadores podría
amplificar las huellas de secuencias retrovirales endógenas, dar resultados falsos positivos [18]).

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Carlos III, Abbot, La Paz, Clinic de Barcelona, German Trias de Badalona

De las 1.103 muestras de plasma, 3 (0,3%) fueron p15E serorreactivos con una muestra / punto de corte (S / CO) de> 1.0: 2 pacientes HTLV-1 (S / CO 1.2 y 4.8) y 1 paciente con hepatitis C crónica (S / CO 1.04). De los 662 PBMC prueba de ADN por PCR, 4 / 69 (5,8%) muestras de pacientes con estadio T1 PC (2), T2 (1), o cáncer T3 (1) fueron repetidamente positivo para XMRV mordaza secuencias. Sin embargo, las secuencias de env XMRV no podría ser amplificado por PCR a partir del ADN de estos cuatro pacientes. Por otra parte, ningún paciente tuvo ambos p15E anticuerpos detectables y secuencias XMRV mordaza.
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XMRV Induces a Nonproductive Infection in Human Lymphoid Tissue
Marta Curriu1, J Carrillo1, M Massanella1, E Garcia1, B Clotet1, C Carrato2, J Blanco1, and C Cabrera1
1Fndn irsiCaixa, Badalona, Spain and 2Hosp Univ Germans Trias i Pujol, Barcelona, Spain

Nuestros datos muestran que el XMRV podrían integrarse en las células del tejido linfoide humanos, aunque este proceso no culmina en una infección productiva explícito. Además, esta infección no se tradujo en cambios de células T o B ni una activación inmune, lo que sugiere que el tejido linfoide puede ser un reservorio de la infección latente en los tejidos XMRV.
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Presence of XMRV Sequences in B Cells Are Restricted by APOBEC
Jorge Carrillo1, J Blanco1, E Garcia1, J Arreal2, B Clotet1, and C Cabrera1
1Fndn irsiCaixa, Barcelona, Spain and 2Hosp Univ Germans Trias i Pujol, Barcelona, Spain

A pesar de las discrepancias observadas en los métodos PCR diferentes, nuestros datos confirman que el virus-transformado líneas de células B puerto de secuencias específicas XMRV, aunque el establecimiento de esta infección puede ser modulada por el factor de restricción innata APOBEC 3G. Nuestros datos sugieren que, in vivo, las células B puede representar un reservorio de XMRV contribuir a su patogenia potencial.

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William Switzer1, H Jia1, H Zheng1, S Tang1, R Garcia2, and B Satterfield2
1CDC, Atlanta, GA, US and 2Cooperative Diagnostics, Greenwood, SC, US

Resultados: No encontramos ninguna evidencia de cualquiera de XMRV MLV o en los 45 casos de síndrome de fatiga crónica y en las 42 personas sin síndrome de fatiga crónica mediante una estrategia de evaluación integral.

Conclusiones: Nuestros resultados, combinados con estudios previos negativos, no sugieren una asociación de XMRV / MLV en la mayoría de los casos de síndrome de fatiga crónica en los EE.UU.. Las diferencias en las poblaciones de pacientes pueden explicar los resultados discordantes observados en cada estudio. Es necesario seguir trabajando para determinar la prevalencia de XMRV y MLV en personas con síndrome de fatiga crónica y evaluar una relación causal de estos virus se encuentran en un subconjunto de casos SFC

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CDC
Conclusiones: Nuestros resultados sugieren que el XMRV es un mosaico complejo resultante de múltiples eventos de recombinación, que puedan producirse durante un período significativo de tiempo. Más investigación será necesario investigar más a fondo la estructura de mosaico de XMRV y determinar si la recombinación se produjeron antes o después de cruzar a los humanos. Además, se debe tener cuidado al usar pequeñas regiones genómicas para la inferencia filogenética de MLV y tropismo XMRV ya que este análisis puede estar influenciado por la recombinación viral.

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En fin, se me apelotonan las preguntas (y la decepción) porque si nos atenemos a estos estudios, realmente no hay nada concluyente...
¿No se presentó nada más? ¿Meirleir nunca va a publicar nada? ¿el WPI no tenía nada que presentar?...

Saludos

Por lo que se dice por ahí, Mikovits no fué invitada, pero no sé si la asistencia era estrictamente por invitación o si es que hace falta publicar para participar.

Por su parte, el WPI ha difundido un estudio de Mikovits (que creo que está pendiente de publicación, dicen - lo colgué ayer en el foro) en el que afirma que el XMRV nace de la fusión ¿? (no sé si es la palabra adecuada, pero hoy tengo un dolor que no sé lo que me digo...) del PreXMRV1 y el PreXMRV2 y que eso indica que el XMRV no se da ni en ratones ni en tejido de ratón, sino que esta combinación del los dos PreXMRV sólo se da en humanos.

Así que, en principio, algo tenía Mikovits que presentar, pero igual ha ido demasiado justa en fechas, no sé...

El problema Sergio, es que aunque en Can Ruti encontraron anergia en los CD8 los NK, no se pronuncian en el sentido de que la causa de que esta anergia, sea la infección por XMRV. Supongo que el motivo es que la anergia estaba en todos los pacientes analizados mientras que el retrovirus sólo lo encontraron en unos pocos, con lo cual no pueden decir que ésta sea la causa de la anergia. No sé si me explico bien, hoy estoy espesilla.....

La cuestión es que las conclusiones de Soriano se atienen a lo presentado en la Conferencia, y desde esa perspectiva sí son ciertas.... porque lo que se presenta allí, incluido Can Ruti, no hay relación concluyente entre sfc y xmrv, ni tampoco de la patogenia del xmrv.
Que existe... eso no no lo pone nadie en duda.

Lo siento Sergio, pero llevas mal las cuentas, en can Ruti sólo encontraron CUATRO positivos de once...en un cultivo de cuatro semanas. Y son ellos precisamente los que no estan nada convencidos de que la causa de la anergia sea el retrovirus, y eso que al principio estaban superemocionados con la idea.

Hola Esther, lo he revisado:

En cultivo no encontraron ningún positivo. Lo hicieron en PCR:

ENV: 4 positivos sobre 21 de los cuales, 3 con SFC, 1 sano

GAG: 3 positivos sobre 21 de los cuales, 1 SFC, 1 sano, 1 HIV

POL: 7 positivos sobre 14 de los cuales 4 SFC, 2 sanos, 1 HIV

(http://www.rebelion.org/noticia.php?id=113635" onclick="window.open(this.href);return false;)

Abajo pongo el estudio, que coincide con estos datos.

Es decir, que como mínimo, encontraron 4 positivos (suponiendo que los demás tests positivos fueran encontrados en los mismos 4 pacientes), y como máximo 8 (suponiendo que los encontraron en pacientes distintos). Yo leí 7 u lo oí en alguna entrevista. Además la estadística la sitúan en sobre el 72%, que corresponde a 7 y no a 4.

¿Tú sabes que son 4 de 8 posibles entonces?

De todos modos, da igual, si es que el PCR no es fiable. podrían ser todos positivos y dar negativo por PCR... Y fue la Dra. Cabrera la que explicó que no había fondos para haber hecho un cultivo más exahustivo, pues no encontraron ningún positivo en las amígdalas cultivadas...

Aquí está el estudio. Un besito!:

Detection of XMRV sequences in EBV-transformed B cell lines
J. Blanco1, J. Carrillo1, E. Garcia1, J. Areal2, B. Clotet1, C. Cabrera1
1IrsiCaixa Foundation, Retrovirology Lab, Barcelona, Spain; 2HUGTIP, Urology Dept, Barcelona, Spain
Background: XMRV infection has been found in humans linked with prostate cancer and chronic fatigue syndrome (CFS). XMRV is able to infect a wide range of cells and has been found in a variety of cell types both in Vitro and in vivo, including B cells and other immune cell types.
Materials and methods: In order to determine the presence of XMRV sequences in B cells, we have screened 21 B cell lines available in our laboratory. These cells were generated by EBV immortalization of PBMC obtained from 11 CFS affected individuals (fulfilling both Fukuda and Canadian criteria), 5 healthy donors, 4 HIV infected individuals and 1 prostate cancer patient. DNA was extracted from dry cell pellets and XMRV sequences were amplified using a real-time PCR covering a 150bp pol sequence and using a nested approach in both gag and Env genes.
Results: Envelope amplification yielded positive bands in 4 out of 21 individuals tested, 3 CFS affected individuals and 1 healthy donor. However, gag amplification yielded only 3 positive samples (1 CFS affected individual, 1 healthy donor and one HIV+ patient). In contrast, Real-time PCR of Pol fragment detected 7 positives samples in 14 individuals tested (4 SFC , 2 donors and 1 HIV+ individuals). To confirm the presence of XMRV sequences we performed sequence analyses of gag and env amplicons. The analysis of the three available gag sequences confirmed the XMRV characteristic 24-nt deletion, which is not found in any known exogenous MuLV. Sequences were 100% identical to reported XMRV sequences. Furthermore, envelope sequences were also homologous to previously described XMRV sequences. In this case, sequence variability was low or absent. Interestingly, most of changes observed corresponded to G to A mutations that were accumulated in one positive sample.
Conclusions: Despite the discrepancies observed in the different PCR approaches using gag, pol or env sequences, our data suggest that EBV transformed B cell lines harbor XMRV specific sequences, and therefore this cell type may represent a reservoir for XMRV

Caray, no lo habia visto, tal vez esto haya sido posterior a la conferencia que nos dieron.
Mi hijo tuvo una entrevista con la Dra.Cabrera y otra con la dra. Rigau (me acompañó en mi última visita), y en esos momentos, en los que se supone que ya tenian los datos, siempre hablaron de sólo cuatro positivos. Es mas, nos mostraron un gráfico con las diferentes muestras numeradas,y sólo habia cuatro positivas, y de estas cuatro, tan sólo una daba positiva en los tres análisis (a qué no sabes cuál...? jaja). A partir de ese momento dejé de leer los informes, pensando que ya habia visto los resultado definitivos, pero veo que me equivoco, tal vez continuaron el estudio un poco mas despues de hablar con nosotros. Estas en todo, eres the BOSS!!!
Besos

Tienes razón, Sergio, de repente se me ha encendido una lucecita, creo que eran cuatro en SFC y siete en total, he buscado los datos de la entrevista que le hizo mi hijo a la Dra.Cabrera, te la pego por si te interesa a ti o a los demás, creo que aclara algunas de estas dudas que tenemos.
Ella dice que han usado el sistema del WPI y que las células se cultivaron antes de hacer el PCR ( en persona nos dijo que cuatro semanas). Te aseguro que es una persona muy clara, y no tengo ninguna duda de que la entrevista fue sincera, todavia se la siente muy "ingenua" por decirlo de alguna forma, no creo que se mueva por intereses ni presiones, al menos no todavia cuando la conocimos, ahora mismo ya no lo sé. Perdón por el lapsus, estoy batallando una aumentada disbiosis y tengo la cabeza muy poco funcional , hacia meses que estaba muy espesa y dolorida y el último resultado me aclaró los motivos: clostridia a millones, E.Coli, Helicobacter Pylori, fusobacterias,prevotella, parásitos, candidas...para montar un supermercado bacteriológico alguien quiere alguna colonia bacteriana, algun gusanito...? lo puedo enviar por Fedex...

Besos.

ENTREVISTA:

-Podría Ud. explicar como afecta el XMRV a los enfermos infectados

En estos momentos no sabemos cómo afecta el virus XMRV a los pacientes. Actualmente sólo tenemos datos de la presencia de este virus en muestras de sangre de pacientes que están diagnosticados con el Síndrome de Fatiga Crónica. La sola presencia del virus no nos dice que éste sea el causante de los daños inmunológicos que los pacientes que sufren esta enfermedad tienen. Sabremos que efecto tiene cuando aislemos el virus de pacientes y lo estudiemos en el laboratorio. Mediante experimentos en el laboratorio podremos decir si este virus puede dañar a las células del sistema inmunológico u otras células de una manera similar a lo que vemos en un paciente.

-¿Qué pruebas se están realizando en Can Ruti para detectar el XMRV?

En el laboratorio irsiCaixa se están realizando pruebas para detectar el virus mediante cultivo de plasma o células de paciente, además de otras pruebas como pueden ser, detección del virus en algunos tipos de células de la sangre específicas como los linfocitos de sangre periférica de tipo B.

-Tengo entendido que han encontrado trazas de ADN del retrovirus en 4 de las once muestras de enfermos de SFC analizadas, pero que no han conseguido que se replique, ¿qué quiere decir exactamente esto? ¿Qué significado tiene a nivel de laboratorio y qué significado tiene para el paciente?

Efectivamente hemos encontrado la presencia de DNA del virus XMRV en alguno de los pacientes que hemos estudiado pero no hemos podido encontrar virus que repliquen. Esto puede significar varias cosas; 1) que el virus se encuentre en cantidades tan bajas que actualmente nuestras técnicas no son capaces de aislar virus completos. Esto a nivel del enfermo significaría que en su cuerpo hay muy pocos virus por lo que sería una gran noticia. Aunque podría ser que el virus se pudiera activar y volver a producir cantidades más elevadas ante algunos estímulos; 2) que en estos pacientes los virus no son infecciosos, lo cual significaría que el paciente se infectó con este virus pero con el paso del tiempo el virus cambió y ya no puede volver a infectar, lo cual también sería una gran noticia puesto que el virus ya no podría causar más daños al paciente; 3) obviamente a nivel de laboratorio significa que hemos de seguir mejorando nuestras técnicas para descartar tanto la posibilidad de que el virus esté y no lo podamos detectar o que el virus este “dormido” y mediante algunas intervenciones podamos hacer que “despierte” y podamos entonces detectarlo.

-¿Podría explicar en palabras sencillas, si es posible, qué diferencias hay entre la técnica de análisis por PCR utilizadas en Can Ruti, que ha dado siete positivos, y la técnica con el mismo nombre PCR, usado en los estudios del Carlos lll, los de Inglaterra y los de Holanda, cuyos resultados han sido todos negativos?

Las técnicas son totalmente diferentes y al mismo tiempo iguales. Esto significa que nosotros antes de hacer la PCR hemos cultivado durantes semanas o meses las células de los pacientes en el laboratorio para poder aumentar la cantidad de virus y después hemos hecho la PCR seguramente muy similar a la realizada en estos estudios.

-¿Han usado ustedes las mismas técnicas de análisis que usaron en el WPI? ¿Todas ellas?

Sí, estamos usando todas las técnicas que usan en WPI, excepto la detección de anticuerpos.

-¿Por qué es tan difícil detectar este retrovirus?

Posiblemente porque se encuentra en condiciones normales en cantidades muy bajas en la sangre de los pacientes.

-¿Han podido comprobar si los pacientes que han dado positivo tenían anticuerpos contra el retrovirus?

No, en estos momentos nosotros no miramos la presencia de anticuerpos en los pacientes no descartamos hacerlo en breve pero de momento no disponemos de esta técnica.

-¿Cuáles han sido las conclusiones principales del primer estudio realizado en Can Ruti?

La conclusiones de momento son pocas ya que en nuestro estudio se han incluido un número muy bajo de pacientes, pero podríamos decir que 1) los pacientes con Síndrome de Fatiga Crónica tienes afectaciones a nivel del sistema inmunológico y 2) que existen rastros de DNA del retrovirus XMRV en las células de la sangre de algunos de estos pacientes, aunque no hemos detectado la presencia de virus infecciosos en dichos pacientes.

-¿Es cierto que se está subvencionando el estudio del XMRV en VH, donde según tengo entendido no hay ni el laboratorio, ni la técnica, ni los especialistas adecuados para que los resultados den positivos, y que a Can Ruti, donde sí hay todas estas condiciones le ha sido denegada la subvención? ¿Tiene alguna idea de los motivos de que les hayan denegado la subvención por segunda vez...?

Sí que es cierto que el VH tiene una subvención, creo que más concretamente el Banco de Sangre, pero no es cierto que ellos no disponen de laboratorio, ni técnicas adecuadas ni especialistas. Ellos hacen unas técnicas diferentes a nosotros pero eso no quiere decir que no tengan personal totalmente preparado.
La verdad es que no se porque de momento no nos han dado la subvención que hemos solicitado pero estamos apelando a dicha denegación y esperamos que las cosa mejoren, auque si bien es cierto que nunca es fácil conseguir dinero para investigar y menos aún en tiempos de crisis.

-En Can Ruti también se investiga el VIH, ¿Cuánto cuesta aproximadamente el tratamiento antirretroviral de un afectado de VIH mensualmente?

La verdad no se el coste de el tratamiento de un paciente infectado con VIH. El tratamiento es gratis para los pacientes y lo paga la seguridad social.

-Suponiendo que en algún momento se llegue a reconocer el XMRV como una de las infecciones que arrastran los enfermos de SFC, sea o no ésta la causa de la enfermedad, ¿qué tipo de especialistas deberían tratar a estos enfermos?
Creo que los médicos que pondrían tratar a este tipo de pacientes serian médicos de medicina interna, que en muchos casos ya son los médicos encargados de visitarlos actualmente.

-¿Cuál cree Ud. que puede ser la causa de las reticencias de los gobiernos a investigar lo que aparentemente puede ser una pandemia mucho más real y destructiva que la gripe aviar o la gripe porcina?

Yo de momento me niego a pensar que ningún gobierno este interesado en no investigar una enfermedad a que afecta a alguien.

-¿Qué consecuencias puede tener el retraso en la investigación de este retrovirus? ¿Podría compararse a lo que ocurrió al principio con el virus del VIH?

No pienso que exista un retraso en la investigación. Hace SOLO un año del primer trabajo sobre este virus y su asociación con el SFC y son muchísimos los laboratorios que han iniciado investigaciones en este nuevo retrovirus

-¿Cree Ud. , con los todavía limitados conocimientos que existen en este momento sobre el retrovirus XMRV, que esta infección puede ser la única causa del SFC, o que simplemente es un oportunista el cual aprovecha la debilidad de los afectados de SFC para entrar en su sistema?

Sinceramente no lo se. Con los datos que tenemos ahora es muy arriesgado decir si es o no la causa o la consecuencia.

-¿Puede tener algo que ver el código genético de cada uno con la facilidad para ser infectado por este retrovirus? Parece ser que Judi Mikovits ha relacionado una serie de genes con la susceptibilidad a la enfermedad, ¿qué puede decirme sobre esto?

Posiblemente al igual que ocurre con otros retrovirus, entre ellos el VIH, podrían existir personas en la población con un genoma que favorezca que se infecten al igual que pueden existir personas cuyo genoma los haría que no se infectasen o para ellos la infección no causara ningún tipo de daño.

-¿Se sabe algo sobre el modo en que se puede transmitir éste virus?

No, de momento tampoco sabemos el modo en el que este retrovirus se transmitiría.
Estamos todavía en los inicios de la investigación de este nuevo retrovirus y poco a poco se irá conociendo más sobre él. Se que es difícil pedirle paciencia a alguien afectado con este Síndrome pero los científicos que trabajamos en este tema estamos totalmente volcados para poder ofrecer lo más rápido posible alguna respuesta a el gran numero de preguntas sin respuesta.


Cecilia Cabrera.
Fundación irsiCaixa.
Laboratorio de Retrovirología[/color]

Hola a todos,

estoy totalmente con lo que aquí se debate y que Sergio y yo estemos tan de acuerdo, es todo un hito!

Lo cierto es que con una PCR no se puede descartar que un negativo lo sea (el positivo, siempre lo será)

En cuanto al número, creo que fueron 4 positivos por PCR (aunque en 3 de ellos no se les llevó a cabo la determinación), 2 controles y una persona con HIV.

En cuanto a la disregulación inmune, fueron los 11 pacientes con SFC-EM los que mostraron la anergia en T8 y la alta incidencia de CD56 dim (concretamente CD57) en NK.

Claro, no exponer esto último en el CROI...¿?
Por otro lado, no entendemos (o lo entendemos demasiado) que Soriano hiciese análisis a tutiplen si no era capaz de encontrar ni uno (bueno, si, el de la validación positiva, en un enfermo de cáncer de próstata).

No creeis que si nos "hubise querido ayudar" no hubiese mirado también la función inmune?

No es por hacer publicidad, pero decimos cosillas sobre esto en http://www.asssem.org" onclick="window.open(this.href);return false;

Un saludo cordial,
JoseL y el equipo de ASSSEM